1.仪器与试药岛津LC-10A液相色谱仪;SPD-10A可调波长检测器;C-R7Aeplus数据处理机。
萘丁美酮对照品(含量为99.85%)、原料,西南合成制药厂;茶碱,中国药品生物制品检定所;萘丁美酮片,江西黎明制药厂。甲醇、醋酸钠、冰醋酸均为分析纯;水为重蒸水。
2.色谱条件色谱柱:岛津Shim-packCLC-ODS柱,150mm×4.6mm;流动相:甲醇-0.05mol.L-1醋酸盐缓冲液 (0.05mol.L-1醋酸钠水溶液用冰醋酸调pH为3.5)(65∶35);流速:1.0mL.min-1;检测波长:254nm;进样 量:10μL。
萘丁美酮及内标在上述色谱条件下的色谱图见图1。
3.线性关系精密称取萘丁美酮对 照品和内标物茶碱适量,分别用甲醇配制成1.08mg.mL-1及1.05mg.mL-1的溶液。精密量取对照品溶液2.0、3.0、4.0、5.0、 6.0、7.0、8.0mL分别置25mL量瓶中,各精密加入内标溶液5mL,用甲醇稀释至刻度,摇匀,进样测定。结果表明,萘丁美酮浓度在 86.4~345.6μg.mL-1范围内峰面积比与样品浓度呈良好线性关系,其回归方程(n=7)为:Y=3.43×10-3 5.64×10-3Xr=0.99981.茶碱(1.88min)2.萘丁美酮(3.75min)
4.样品测定4.1原料的含量测定精密称取样品约100mg,置100mL量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度。精密吸取5mL置25mL量瓶中,精密加入内标溶液5mL,用甲醇稀释至刻度,摇匀,进样测定。用内标法计算含量。3批原料测定结果见表1。
样品标示量%RSD/%199.470.5299.680.7399.450.7表1原料含量测定(n=3)
4.2片剂的含量测定取片剂20片,精密称定,研细,精密称取适量(相当于萘丁美酮约500mg),置500mL量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,滤过。精密吸取续滤液5mL置25mL量瓶中,精密加入内标溶液5mL,加甲醇至刻度,摇匀,进样测定。
3批样品测定结果见表2。
样 品标示量%RSD/%195.890.7297.660.43100.00.65讨论5.1作者按萘丁美酮片剂**比例称取辅料和萘丁美酮对照品,进行回 收试验考察,5次测定结果的平均回收率为99.46%,RSD为0.6%。试验证明,本法采用茶碱为内标物,可提高分析结果的重现性,避免由于进样及仪器 因素造成的系统误差,也可避免杂质、辅料等参加的紫外分光光度法引起的误差。
5.2流动相中甲醇的加入量及流动相的pH对内 标,特别是对样品的出峰时间、峰形有显著影响。甲醇加入量越大、pH越低,能加快出峰时间,改善峰形。经多次实验选择,配比为甲醇-0.05mol.L- 1醋酸盐缓冲液(65∶35,pH3.5)的流动相较佳,出峰快,峰形、分离度好,结果满意。
5.3本品溶液置无色透明的量瓶中,放置1周,样品与内标峰面积比值基本不变,溶液是稳定的。